富血小板纤维蛋白在拔牙中的应用

就是在拔牙前采集患者自体血,离心以后把上清成分置入拔牙窝内。最近实操了两例,查查文献看看原理。
有学者研究发现68.5%的阻生下颌智齿紧邻第2磨牙,此类智齿拔除后通常会导致相邻第2磨牙远中牙槽骨缺失和牙周袋形成,出现牙齿松动的情况,给患者带来非常大的影响。
富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin , PRF) 、改良型富血小板纤维蛋白 (advancedplatelet-rich fibrin,A-PRF)、富自体生长因子纤维蛋白凝胶的成分及作用机制,证实其具有良好的诱导骨再生的作用。
文献[1]的作者研究了A-PRF在下颌智齿拔除后邻牙远中骨缺损修复中的作用,发现其对下颌智齿拔除后邻牙远中骨缺损修复中有良好的促进作用。主要是术后骨密度显著高于对照组。文献[2]的作者发现拔除下颌智齿后使用PRF能降低下颌第二磨牙的附着丧失。
文献[1]的A-PRF的制备方式是:采集自体静脉血10mL注入真空负压管,立即放入离心机中,以转速1500r/min离心14min,静置10min,可见试管中血液分为3层,最上层淡黄色液体为血清贫血小板血浆,中间层胶 冻状物为改良型富血小板纤维蛋白凝胶,底层为红细胞。 将血清倾倒出来,用无菌镊子从采集管中取出改良型富血小板纤维蛋白凝胶,用无菌剪刀去除底部红细胞层(交界处红细胞层可适量保留),即获得改良型富血小板纤维蛋白凝胶,静置备用。缝合采用半8字交叉缝合法:半8字缝合法即从颊侧黏膜瓣外进针,穿过该黏膜瓣内面出针后,引线从舌侧环穿第2磨牙与第1磨牙的间隙从颊侧出针,再从舌侧黏膜瓣内进针,穿过黏膜瓣外面出针,完成结扎。

具体的操作方法不同的文献略有不同,比如文献[2]为采静脉血20ml,离心3000r/min,10min。去除试管内最顶端淡黄色清 亮血浆层及最底端暗色红细胞层,即收集淡黄色凝胶状物质,即制得PRF凝胶。将此PRF凝胶进一步加工,释放其中血清。将其置于灭菌的干燥纱布上吸干,同时轻轻挤压即可制得临床所需的PRF,其具有一定形态及韧性。
在血小板被激活后,大量的生长因子也被释放出来,包括血小板衍生生长因子、转化生长因子β、类胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子6种,他们促进细胞增殖、协同成骨细胞、抑制破骨细胞,使骨形成大于骨吸收,加快骨组织的形成。而纤维网状支架结构有利于细胞黏附增殖,来支持生长因子所诱导生成的新生组织。改良型富血小板纤维蛋白凝胶是由自体静脉血制成,排除了免疫排斥和感染的风险,不存在安全隐患。制备过程简便易行,价格低廉,容易在临床得到推广。改良型富血小板纤维蛋白诱导形成的新生骨在术后3个月时能获得较好的骨质,随着时间的延长成骨数量更多、质量更好。
骨缺损可按其能否包含住骨移植材料分为腔隙性 骨缺损和非腔隙性骨缺损。腔隙性骨缺损,又称能含骨的骨缺损,虽然有骨缺损,但缺损有立体空间,形成腔隙,能包含住骨移植材料。骨缺损后骨组织的重建属于修复性再生,修复性再生有3种基本过程: 骨生成、骨诱导和骨引导。这三种基本过程都不可或缺。 常用的骨移植代用品无成骨能力及骨诱导活性,仅为新骨生成提供一个物理支架,新骨的生长主要依赖于 周围的自体骨壁,所以常规进行牙拔除或骨内病变处理时应注意小心保留足够多的骨性袋。 富血小板纤维蛋白( PRF) 富含多种生长因子及白细胞、血小板,具有诱导组织再生修复和促进愈合的特性。其在形成过程中缓慢聚合形成纤维蛋白网呈三分子立体网状结构,不仅较好地模拟了生理性的凝血过程,而且还能够引导细胞迁移至创口处,有利于局部微血管的形成和创口的快速愈合,所以,众多学者也将PRF称作一种以纤维蛋白为基础的生物材料。PRF通过其纤维蛋白网状结构提供支架作用,利于氧和各种营养物质通过支架弥散到细胞周围; PRF中包含的多 种具有生物学活性的生长因子如转化生长因子-β、血管内皮生长因子、血小板生长因子共同发挥作用, 使得PRF在口腔软硬组织创伤的修复中,起到良好的促进作用。其中血管内皮生长因子不仅能够促进血管 形成,同时也能够促进骨原细胞以及成骨细胞的迁移、增殖,血小板生长因子能够促进成骨细胞的分化以及增殖,转化生长因子-β 能够增加骨保护素的表达。所有因素共同发挥作用,PRF在骨组织愈合过程中发挥重要作用。PRF具有缓慢地释放各种生长因子的特性,其维持时间可以长达25d左右,表明在创口 愈合过程中PRF 能够在较长的时间内充分发挥其促进软硬组织修复的作用,参与到软硬组织修复的整个过程中,促进组织愈合。
文献[3]总结了PRF的结构及特性。它是由法国学者Choukroun等于2000年首次成功提取的,制备过程简单,完全取自于自体血,无需添加额外的抗凝剂及凝血酶。PRF呈疏松的三维立体网状结构,主要由纤维蛋白构成,富含大量具有抗感染能力及免疫学价值的白细胞,这种网状结构具有良好的可塑 性,并使细胞黏附迁移的空间得以维持,有利于细胞因子及氧气弥散至细胞周围,促进骨髓干细胞向成骨细胞分化,加速成骨。PRF诱导骨组织形成的机制:PRF作用的发挥不仅依赖其纤维网状结构,还有其高浓度的各类生长因子。如TGF-β(转化生长因子β)、PDGF(血小板衍生生长因子)、IGF(类胰岛素生长因子)、VEGF(血管内皮生长因子)、EGF(表皮生长因子)等。PRF诱导软组织形成的机制:提供支架、高浓度的促进创面修复愈合的细胞生长因子。
再来看其制备方法[4]:为了成功制备PRF,快速血液收集和在 凝血反应开始前直接离心是绝对必要的。PRF制备过程同时进行着离心反应和凝集反应。离心作用即在离心机强 大的离心力作用下,使血液中血细胞的沉降加快,把血液中不同沉降速率(基于粒子的大小、形状和密度等决定)的物质分开,实现血液分层;凝集反应类似于人体生理凝血过程,依赖血液样本含有的少量凝血酶将纤维蛋白原缓慢转化为纤维蛋白网状结构,这种缓慢聚合过程更符合生理 凝血机制,应用于临床也会引起一个更高效的细胞迁移和扩散,促进软硬组织愈合。 制备的PRF包括以下3层:上层贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),中间层PRF凝胶,下层为红细胞层。离心的转速和时间各有不同,创始人的方法是3000r/min离心10min。改良的则为1500r/min离心14min。有研究比较了2500-4000r/min的离心速度离心10min的产物纤维蛋白结构及细胞分布无明显差异。还有研究认为3000r/min离心10分钟的产物释放量最高。离心试管,塑料的要比玻璃的释放VEGF含量低。除水方式有静置10min(缓慢脱水)和压制成膜/块(快速脱水)两种方式,临床常采用快速脱水的方式。保存方法:由于PRF制作方法较为简单,其蕴含的生长因子在制作完成后1h内大量释放,以及没有很好的保存方法,故建议在制作后尽早使用。
最后来看PRF和A-PRF的超微结构[5]。该文比较了PRF和A-PRF的超微结构,HE染色见A-PRF纤维蛋白层更宽,含有细胞数量特别是中性粒细胞数量更多,A-PRF膜白细胞层远端存在更多的血小板及细胞。扫描电镜下,A-PRF较PRF纤维网格空隙更大,结构更疏松,网络的细胞数量更多。结论A-PRF膜的纤维结构比PRF膜更松散,细胞含量更多,为生长因子的持续释放提供了更有利的结构基础。研究中PRF的制备方法是3000r/min离心10min,A-PRF的离心方法是1500r/min离心14min。压制成膜时,应注意保留凝胶远端的少量红细胞层。

总结一下:富血小板纤维蛋白是采集患者静脉血,1500转/分离心14分钟后取中段产物压制成膜制成的,用于填塞拔牙后的牙槽窝,利于拔牙创的愈合和骨修复。
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参考文献:
[1] 罗艺,王恩群,许雅婷 等.改良型富血小板纤维蛋白修复下颌智齿拔除后邻牙远中骨缺损.中国组织工程研究,2019;23(15):2314-2319. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1143.
[2] 吕敏,雷志敏,严加林 等.富血小板纤维蛋白在促进智齿拔除后下颌骨腔隙性缺损修复的研究.临床口腔医学杂志,2017年9月第33卷第9期.
[3] 张鹏飞,范亚伟. PRF在牙槽嵴位点保存中应用的研究进展.中国口腔种植学杂志2016年第21卷第3期.
[4] 毛俊丽,王拓,孙勇 等.PRF的制备及保存方法的研究进展.西南国防医药2016年3月第26卷第3期.
[5] 练轶,毛俊丽,孙嵩 等.A-PRF与PRF的成分及超微结构观察. 西南国防医药2017年6月第27卷第6期.

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